1. 定义
    1g固体酶粉在40℃和pH值3.0条件下，1min水解酪素产生1微克酪氨酸的酶量为1个酶活力单位，以u/g表示。
2 原理
    蛋白酶在一定的温度和pH条件下，水解底物酪素产生含有酚基的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸等)，在碱性条件下，将福林试剂(Folin)还原，生成钼蓝与钨蓝，用分光光度计测定，计算其酶活力。
3.试剂和溶液
3.1  1 mol/L及0.1mol/L盐酸(HCl)溶液
取浓盐酸85ml，加水稀释并定容至1000ml，即为1 mol/L盐酸溶液；取100ml 1 mol/L盐酸溶液，定容1000ml，即为0.1mol/L盐酸溶液。
3.2 100mg/ml L－酪氨酸标准液
精确称取预先于105℃干燥至恒重的L－酪氨酸0.1000g，精确至0.0001g。用1 mol/L盐酸60ml溶解后定容至100ml，即为1mg/ml酪氨酸标准溶液。吸取1mg/ml酪氨酸标准溶液10.0ml，用0.1mol/L盐酸定容至100ml，即得到100mg/ml L－酪氨酸标准液。
3.3 0.4mol/L碳酸钠(Na2CO3)溶液
    称取无水碳酸钠(Na2CO3)42.4g，用蒸馏水溶解并定容至1000ml。
3.4 福林 (Folin) 试剂
于2000ml磨口回流装置中加入钨酸钠(Na2WO4·2H2O)100g、钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)25g、蒸馏水700ml、85％磷酸50ml、浓盐酸100ml。小火沸腾回流10小时，取下回流冷却器，在通风厨中加入硫酸锂(Li2SO4)50g，加蒸馏水50ml和数滴浓(99％)溴水，再微沸15min，以除去多余的溴(冷后仍有绿色需再加溴水，再煮沸除去过量的溴)，冷却后加蒸馏水定容至1000ml。混匀、过滤。试剂应呈金黄色，贮存于棕色瓶内。使用时，以1份原Folin溶液与2份蒸馏水混匀。
3.5 乳酸缓冲液
    甲液：称取80～90％乳酸10.6g，加水稀释并定容至1000ml。
    乙液：称取70％乳酸钠16g，加水稀释并定容至1000ml。
    使用液：取甲液8ml，加乙液1ml，再准确稀释1倍。用pH计校正pH至3.0。
3.6 1.0%酪素溶液
    称取酪素1.000g，精确至0.0001g，先用少量(3～4ml)浓乳酸湿润后，再加入乳酸缓冲液约80ml，在沸水浴中边加热边搅拌直至完全溶解。冷却后转入100ml容量瓶中，用乳酸缓冲液定容至刻度。此溶液在4℃冰箱贮存，有效期为3天。
3.7 0.4mol/L三氯乙酸(CCl3—COOH)溶液
    称取三氯乙酸65.4g，用蒸馏水溶解并定容至1000ml。
4.仪器和设备
4.1 恒温水浴锅。
4.2 分光光度计
    有10mm比色皿，可在660nm处测量吸光度。
5测定步骤
5.1 标准曲线绘制
    分别吸取100mg/ml L－酪氨酸标准液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml于10ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，制成每ml分别含L－酪氨酸0、10、20、30、40、50、60mg的稀标准液。各取上述溶液1.00ml（须做平行试验）于试管中，加入0.4mol/L碳酸钠溶液5.00ml，稀福林试剂 1.00ml，置于40℃水浴中显色20min，取出用10mm比色皿，在波长660nm处用分光光度计分别测定其吸光度，其中不含酪氨酸的管为空白对照。以吸光度为纵坐标，相应的酪氨酸浓度为横坐标，绘制标准曲线或计算回归方程。当吸光度为1时的酪氨酸量(mg)即为比色常数K值。
5.2待测酶液的制备
5.3  比色测定
精确吸取待测酶液1.0ml(每个样品3支平行试管)， 40℃水浴预热2min。同时取适量1%酪素溶液在40℃水浴预热3～5min，然后取其1.0ml，加入到经预热的上述酶液中，立即开始计时，于40℃水浴精确反应10min，立即加入2.0ml0.4mol/L三氯乙酸，摇匀，取出静置10min，过滤，取滤液1.0ml。加入0.4mol/L碳酸钠溶液5.0ml，以后按标准曲线绘制步骤测定样品吸光度。
同时进行空白对照测定，其步骤为吸取待测酶液1.0ml，40℃水浴2 min后加入2.0ml 0.4mol/L三氯乙酸，40℃水浴10min，然后加入1%酪素溶液1.0ml ，取出静置10min，过滤，取滤液1.0ml，以后步骤同于样品测定。
6.计算          
X=(A×K×4×n)/(1×10)
式中：X－样品的酶活力，u/g；
  A－样品平行试验的平均吸光度；
  K－比色常数；
  4－反应试剂体积(ml)；
  n－样品稀释倍数(制备成的酶液ml数/2g酶粉)，ml/g；
  1－参与反应的酶液量，ml；
  10－反应时间，min。